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NGS測序技術服務 DRIP-seq |
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基因芯片技術服務 Small RNA修飾芯片 m6A單堿基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表觀轉錄組芯片 circRNA表觀轉錄組芯片 |
NGS測序技術服務 RNA m6A甲基化測序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA堿基修飾檢測 tRNA堿基修飾檢測 |
PCR技術服務 MeRIP-PCR技術服務 m6A絕對定量RT-PCR技術服務 m6A單堿基位點PCR（MazF酶切法）技術服務 |
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基因芯片技術服務 DNA甲基化芯片 DNA羥甲基化芯片 ChIP-chip |
NGS測序技術服務 DNA甲?；奏?5fc)修飾測序 DNA 5hmC 測序（化學法） DNA甲基化測序 DNA羥甲基化測序 染色質免疫共沉淀測序 |
PCR技術服務 MeDIP-qPCR hMeDIP-qPCR ChIP-qPCR |
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蛋白相對定量 TMT標記定量技術 非標定量技術 |
蛋白修飾 TMT標記定量磷酸化 非標定量磷酸化 |
RNA/蛋白-蛋白相互作用 RNA-蛋白相互作用 蛋白-蛋白相互作用 |
circRNA是目前生命科學領域新興的研究熱點分子之一。區別于傳統的線性RNA，circRNA具有獨特的閉合環狀結構，使得其對核酸酶不敏感，所以比線性RNA更為穩定，非常適合作為臨床診斷標志物（biomarker）。近期研究表明，circRNA主要通過吸附miRNA抑制后者對相應靶基因的調控，稱之為競爭性內源RNA（ceRNA），而與疾病相關聯miRNA的相互作用說明circRNA對疾病的調控起著非常重要的功能。實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑，利用熒光信號實時檢測PCR進程，避免了傳統PCR以終產物檢測定量產生的偏差，提高實驗的重復性。絕對定量的實時熒光定量PCR是在實時熒光定量PCR時加入標準品通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法，能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。
康成生物丨數譜生物為您提供環狀RNA絕對定量實時定量PCR技術服務，您只需要提供保存完好的組織或細胞標本，本公司專業的技術服務人員就可替您完成絕對定量的實時定量PCR實驗操作和數據分析，提供給您完整的實驗報告。
每微克 total RNA target 1 RNA拷貝數=X/3
如果細胞的數量為106，總RNA為15ug，則每個細胞的target 1的拷貝數為：[（X×15）/3]/ 106
1. 引物設計、合成
設計并合成目的基因的特異性PCR引物。
2. 樣品RNA抽提
a. 若實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。
b. 若實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，完全吸去培養液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3. RNA質量檢測
a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。
注：用于實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase 污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4. 逆轉錄合成cDNA
每個樣品我們加入已知濃度的RNA（RNA Spike-in）并使用rtStar? First-Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# AS-FS-001, Arraystar) 試劑盒進行反轉錄,合成cDNA第一鏈。
5. 實時定量PCR
在合成cDNA第一鏈中加入標準品與cDNA一同作為模板進行實時定量PCR擴增，，根據Ct值制備標準曲線。
6. 分析結果、提供實驗報告
各樣品的目的基因和標準品分別進行Realtime PCR反應。根據標準品繪制標準曲線，各樣品目的基因和RNA Spike in的cDNA拷貝數結果直接由機器生成。（每個樣品的目的基因cDNA拷貝數x RNA Spike in的RNA拷貝數）除以RNA Spike in的cDNA拷貝數，即為此樣品此基因的校正后的RNA拷貝數。
