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NGS測序技術服務 DRIP-seq |
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基因芯片技術服務 Small RNA修飾芯片 m6A單堿基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表觀轉錄組芯片 circRNA表觀轉錄組芯片 |
NGS測序技術服務 RNA m6A甲基化測序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA堿基修飾檢測 tRNA堿基修飾檢測 |
PCR技術服務 MeRIP-PCR技術服務 m6A絕對定量RT-PCR技術服務 m6A單堿基位點PCR（MazF酶切法）技術服務 |
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基因芯片技術服務 DNA甲基化芯片 DNA羥甲基化芯片 ChIP-chip |
NGS測序技術服務 DNA甲?；奏?5fc)修飾測序 DNA 5hmC 測序（化學法） DNA甲基化測序 DNA羥甲基化測序 染色質免疫共沉淀測序 |
PCR技術服務 MeDIP-qPCR hMeDIP-qPCR ChIP-qPCR |
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蛋白相對定量 TMT標記定量技術 非標定量技術 |
蛋白修飾 TMT標記定量磷酸化 非標定量磷酸化 |
RNA/蛋白-蛋白相互作用 RNA-蛋白相互作用 蛋白-蛋白相互作用 |
N6-甲基腺嘌呤（m6A）是RNA中豐度最高的轉錄后修飾，在生物學過程中扮演重要角色。很多研究發現，各類RNA上單個m6A即可發揮重要功能。由于缺乏在精確位點鑒定m6A修飾的高靈敏度方法，使得m6A的功能研究很大程度上仍未得到探索。新研究發現，T3 DNA連接酶對m6A修飾有高度的敏感性。在此基礎上，我們建立了一種高靈敏的絕對定量的實時熒光定量PCR定量分析方法，可以在單核苷酸分辨率水平上準確檢測RNA中m6A修飾位點, 并對未知模板進行定量分析。該方法可成功地應用于實際生物樣品中m6A修飾的精確檢測，即使是低豐度RNA的樣本。
康成生物丨數譜生物為您提供m6A絕對定量實時定量PCR技術服務，您只需要提供保存完好的組織或細胞標本，本公司專業的技術服務人員就可替您完成絕對定量的實時定量PCR實驗操作和數據分析，提供給您完整的實驗報告。
每微克 total RNA target 1 RNA拷貝數=X
如果知道細胞的數量為106，總RNA為15ug，則每個細胞的target 1的拷貝數為：（X×15）/ 106
1. 引物設計、合成
設計并合成目的分子的特異性探針。
2. 樣品RNA抽提
a. 若實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。
b. 若實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，完全吸去培養液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3. RNA質量檢測
a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。
注：用于實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase 污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4. 連接反應
每個樣品我們加入已知濃度的RNA（RNA Spike-in），使用連接酶連接特異性探針。
5. 實時定量PCR
連接反應后在管中加入標準品與連接產物一同作為模板進行實時定量PCR擴增，，根據Ct值制備標準曲線。
6. 分析結果、提供實驗報告
各樣品的目的基因和標準品分別進行Realtime PCR反應。根據標準品繪制標準曲線，各樣品目的基因總cDNA濃度、目的基因位點未m6A甲基化cDNA濃度和RNA Spike in的cDNA濃度結果直接由機器生成。【（每個樣品的目的基因總cDNA濃度-目的基因位點未m6A甲基化cDNA濃度）x RNA Spike in的RNA濃度】除以RNA Spike in的cDNA濃度濃度，即為此樣品此目的基因位點m6A甲基化校正后的RNA含量。
