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NGS測序技術服務 DRIP-seq |
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基因芯片技術服務 Small RNA修飾芯片 m6A單堿基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表觀轉錄組芯片 circRNA表觀轉錄組芯片 |
NGS測序技術服務 RNA m6A甲基化測序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA堿基修飾檢測 tRNA堿基修飾檢測 |
PCR技術服務 MeRIP-PCR技術服務 m6A絕對定量RT-PCR技術服務 m6A單堿基位點PCR（MazF酶切法）技術服務 |
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基因芯片技術服務 DNA甲基化芯片 DNA羥甲基化芯片 ChIP-chip |
NGS測序技術服務 DNA甲?；奏?5fc)修飾測序 DNA 5hmC 測序（化學法） DNA甲基化測序 DNA羥甲基化測序 染色質免疫共沉淀測序 |
PCR技術服務 MeDIP-qPCR hMeDIP-qPCR ChIP-qPCR |
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蛋白相對定量 TMT標記定量技術 非標定量技術 |
蛋白修飾 TMT標記定量磷酸化 非標定量磷酸化 |
RNA/蛋白-蛋白相互作用 RNA-蛋白相互作用 蛋白-蛋白相互作用 |
當前的研究發現，很大一部分m6A修飾發生在含有核心ACA序列的保守motif區域，通常稱為是m6ACA位點。康成生物丨數譜生物提供對RNA上潛在m6ACA位點進行檢測或驗證的技術服務——m6A單堿基位點PCR（MazF酶切法）。
RNA內切酶MazF識別RNA單鏈并在非甲基化的ACA位點的5’端進行切割，而不能切割甲基化的m6ACA位點(圖1)。
圖 1. MazF可以在非甲基化ACA位點切割，而無法在甲基化m6ACA位點發揮作用
將抽提的總RNA樣本分為兩份，一份不加MazF處理，另一份加MazF處理后。然后通過實時定量PCR技術進行檢測（圖2）。最后，經過數據分析處理得到檢測的樣品中特定ACA位點的m6A甲基化水平。
圖2. m6ACA位點PCR檢測（MazF酶切法）實驗原理
mRNA&lncRNA m6ACA位點檢測：RNA m6ACA位點預測→total RNA提取&質檢→一份MazF酶處理，一份不加MazF酶處理→反轉錄成cDNA→目標m6ACA位點PCR檢測
CircRNA m6ACA位點檢測：RNA m6ACA位點預測→total RNA提取&質檢→RNase R消化線性RNA，保留circRNA→ 一份MazF酶處理，一份不加MazF酶處理→反轉錄成cDNA→目標m6ACA位點PCR檢測
●對m6A單位點的相對定量檢測
●對m6A位點高度敏感的核糖核酸內切酶MazF
●通過嚴格測試的特異性引物
樣本類型：新鮮組織、細胞或total RNA
樣 本 量：
mRNA&lncRNA m6ACA位點檢測：：≥2μg total RNA或者能獲得相應份量的組織細胞，最低濃度不低于50ng/μl。
CircRNA m6ACA位點檢測：≥10μg total RNA或者能獲得相應份量的組織細胞，最低濃度不低于50ng/μl。
樣品質量：A260/A280為1.9~2.2；無基因組DNA污染；RNA無降解。
樣本運輸：RNA樣品使用RNAase-Free離心管保存，封口膜封口后干冰運輸；組織細胞樣品RNAase-Free凍存管保存，干冰或液氮運輸。
m6ACA位點PCR（MazF酶切法）可對單個m6ACA修飾位點進行檢測（以下為示例展示）。
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sample |
MazF-(Ct) |
MazF+ (Ct) |
Methylation ratio % |
|
1 |
22.970 |
23.354 |
76.611 |
|
2 |
22.968 |
23.854 |
54.101 |
|
3 |
22.980 |
24.774 |
28.856 |
|
4 |
23.033 |
27.340 |
5.051 |
|
5 |
23.006 |
28.308 |
2.535 |
|
6 |
23.008 |
30.821 |
0.452 |
